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抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)概述
抗乙酰膽堿受體抗體主要為IgC型(以IgCl、IGC.2亞類為主,IgC.亞類次之),可檢測到IgM型。不同類型的MG病人血清抗AchR抗體具有不同性質(zhì)。抗AchR抗體的檢測方法最先使用的是放射免疫,以后,為避免使用核素,各種酶聯(lián)免疫法應運而生。這些檢測方法中都要應用。·銀環(huán)蛇毒素(a-bungarotoxin,a-BT):a-BT是從銀環(huán)蛇毒液中提取的一種肽類,分子量為8kD左右。它能高度選擇性與AchR結(jié)合,這種結(jié)合幾乎是不可逆的。如用ELISA法,可用ct-BT預先包被固相載體,然后利用其特異性吸附加入的AchR,再測定待測血清中的抗AchR抗體。ELISA法簡便易行,便于推廣,故將其介紹如下。
1.試劑 ①a-BT:可購得商品;②AchR:取人骨骼肌200—250g,用生理鹽水洗凈,加入濕重2倍量的緩沖液,高速勻漿90s后20 000Xg離心30rain。除去上清(血液、脂質(zhì)),加入濕重2倍量的緩沖液,再次勻漿。向其中加入TritonX-100至最終濃度為2%,4℃攪拌過夜。100 000Xg離心1h,上清即為AchR。也可購買商品;③HRP標記的抗人IgC。
2.操作步驟
(1)用包被液將ct-BT稀釋為最適濃度(用方陣滴定法選出),包被聚苯乙烯反應板,每孔200pL(含ct-BT約為2.5pmol/L)。4℃過夜后用洗滌液洗3次,每次3min(以下同)。
(2)將AchR用稀釋液適當稀釋,加至包被孔中,每孔200btL(0.2pm01),37~C1h。同上洗滌。
(3)力[1X適當稀釋的待測血清,每孔200gL,37℃30min。同上洗滌。
(4)加入最適工作濃度的HRP標記抗人IgC,37℃30rain。同上洗滌。
(5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L,37℃ 30min,mol/LH2S04終止反應。
3.結(jié)果觀察 于酶標儀上測492nm吸光度。以陽性混合血清作為標準血清,制備標準曲線。待測血清中抗AchR抗體含量,可根據(jù)吸光度從標準曲線上換算。
抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)正常值
ELISA法:0.09~0.148或陰性。 (注:具體參考值請根據(jù)各實驗室而定。)
抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)臨床意義
陽性(>0.169):重癥肌無力。 另外,檢出率在合并胸腺瘤的眼肌型、全身型或無胸腺瘤的全身型重癥肌無力病人最高,陽性率達70%以上。
抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)檢查方法
抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)注意事項