端粒酶活性概述

端粒是真核生物染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，由一富含鳥嘌呤的重復(fù)DNA序列及其相關(guān)蛋白組成。端粒是保護染色體末端穩(wěn)定必不可少的結(jié)構(gòu)。端粒長度的維持需要端粒酶活性的存在。永生細胞和腫瘤細胞能夠長期生存，端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白體組成的復(fù)合體，屬一種專一的依賴RNA的逆轉(zhuǎn)錄酶，能以自身的RNA為模板，從頭合成染色體末端的端粒DNA，彌補細胞分裂時端粒DNA的丟失，維持端粒的長度，保持染色體的動態(tài)平衡，使細胞獲得永生化。自建立了高敏感度的、以PCR為基礎(chǔ)的檢測端粒酶的方法以來，端粒酶引起了人們的廣泛關(guān)注。人們發(fā)現(xiàn)，端粒酶與細胞的增生、分化和不死性有著極為密切的關(guān)系，已成為目前腫瘤和衰老基礎(chǔ)研究的熱點之一。 

• 檢查部位 全身
• 科室 腫瘤科
• 相關(guān)疾病 胃癌 前列腺癌 甲狀腺癌 腎細胞癌 腸癌 神經(jīng)母細胞瘤 乳腺癌 大腸癌 肝癌
• 相關(guān)癥狀 腹部腫塊

端粒酶活性正常值

• 陰性。 

端粒酶活性臨床意義

• 1、肝癌患者有較高的端粒酶陽性率(85%)，端粒酶活性陽性者AFP水平明顯高于端粒酶活性陰性者。端粒酶活性與腫瘤大小、組織學分級及腫瘤轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)。端粒酶有可能成為診斷肝癌的腫瘤標志物。
  2、端粒酶在大多數(shù)惡性腫瘤組織有較高水平表達，如神經(jīng)母細胞瘤(94%)、乳腺癌(93%)、大腸癌(93%)、胃癌(85%)、前列腺癌(84%)、肺癌(80%)等。端粒酶活性與腫瘤的臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)。因此，端粒酶是目前最特異和具有普遍性的腫瘤標記物。
  3、在少數(shù)良性病變(如肝炎、肝硬化、良性腦膜瘤等)組織中可有很弱的端粒酶活性。 

端粒酶活性檢查方法

• 檢查操作：
  基因組DNA為0.1μg;緩沖液含50mmol/L氯化鉀，10mmol/L Tris-HCl(pH8.4)，1.5mmol/L氯化鎂，100μg明膠;每一引物為0.25μmol/L;dATP，dCTP，dGTP，dTIP各為200μmol/L;DNA聚合酶為2.5U，終體積為100μl。加數(shù)滴液體石蠟防止蒸發(fā)。
  反應(yīng)周期：
  ①變性：90℃ 30～60s;
  ②引物和模板的退火溫度：40～60℃ 30～60s;
  ③延伸：72℃ 1～2min。經(jīng)反復(fù)循環(huán)30～40次，最后1次72℃引物延伸7min后終止。除去液體石蠟后，產(chǎn)物可供分析。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，用溴乙錠染色，經(jīng)紫外燈照射可見預(yù)料擴增長度的熒光條帶。產(chǎn)物也可與放射標記或非放射標記的寡聚核苷酸探針行Southern印跡雜交或點漬印跡雜交。如用PCR自動儀則更為方便，將反應(yīng)試劑、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入試管后，放進已調(diào)好程序，即所需變性→退火→延伸各自的溫度和時間及循環(huán)次數(shù)的自動儀中進行反應(yīng)，即可獲得滿意的擴增產(chǎn)物。 

端粒酶活性注意事項

• 近年來，“端粒、端粒酶假說”已被越來越多的研究所證實，以端粒酶活性水平為腫瘤診斷的生物標志和預(yù)后指標。
  1.注意防止實驗室污染而出現(xiàn)假陽性或假陰性。
  2.注意去除組織標本中含有的多聚酶抑制劑，減少假陰性。
  3.閃爍分析技術(shù)、ELISA法、原位雜交法較TRAP法檢測結(jié)果更可靠。