【摘要】目的 探討驅(qū)白巴布期片對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法 觀察驅(qū)白巴布期片對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠脾臟和胸腺的重量、Con A和LPS誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能以及血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的影響。結(jié)果 驅(qū)白巴布期片高、中、低劑量治療組均可明顯提高小鼠免疫器官脾、胸腺的重量，可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，可促進(jìn)脾臟B、T淋巴細(xì)胞的增殖，可以顯著降低免疫抑制小鼠血清免疫球蛋白IgG，IgA，lgM含量。結(jié)論 驅(qū)白巴布期片對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的非特異性免疫(巨噬細(xì)胞吞噬功能)和特異性細(xì)胞免疫(脾臟淋巴細(xì)胞的增殖)等功能都有上調(diào)作用，說(shuō)明驅(qū)白巴布期片對(duì)免疫功能有顯著的調(diào)節(jié)作用。

 
驅(qū)白巴布期片為傳統(tǒng)的治療白癜風(fēng)的維吾爾藥物，從維吾爾醫(yī)理論出發(fā)驅(qū)白巴布期片是通過(guò)調(diào)節(jié)人體內(nèi)的四種“赫立特”的平衡、通脈、理血從而達(dá)到治療白癜風(fēng)的目的。然而，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，存在多種假說(shuō)，其中大量資料表明白癜風(fēng)的發(fā)病與自身免疫有關(guān)。但驅(qū)白巴布期片對(duì)機(jī)體免疫功能影響的相關(guān)研究方面仍屬空白。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)研究從非特異性免疫(巨噬細(xì)胞吞噬功能)及特異性細(xì)胞免疫(脾淋巴細(xì)胞增殖)兩個(gè)方面進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 藥材與試劑  復(fù)方驅(qū)白巴布期片(由新疆華康制藥公司提供，批號(hào)：20070123)。環(huán)磷酰胺，200 mg／支，(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20070328)；鹽酸左旋咪唑片(山東省莒南制藥廠，批號(hào)：20070123)；RPMI1640培養(yǎng)液(GIBCO公司)；四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTr，美國(guó)Sigam公司)；刀豆蛋白(ConA，美國(guó)Sigam公司)；脂多糖(LPS，美國(guó)Sigam公司)；小牛血清(杭州四季清生物公司)；淀粉肉湯；5％雞紅細(xì)胞混懸液[自制：取雞血用生理鹽水經(jīng)1 500 r／rain，離心5 rain，洗滌3次，配制成5％( V/V)雞紅細(xì)胞混懸液]。

 
1.2 儀器  CO：培養(yǎng)箱，全自動(dòng)酶標(biāo)儀，全自動(dòng)生化分析儀，電子分析天平，顯微鏡等。

1.3 動(dòng)物昆明小鼠，120只，雄性(20±2)g，由新疆自治區(qū)疾病控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

按完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)方案，將120只小鼠分為12組，每組10只，再將12組動(dòng)物分為A、B兩部分，每部分6組，具體分組及給藥操作：正常對(duì)照組，灌胃以生理鹽水；模型組；陽(yáng)性對(duì)照組，每天灌胃以左旋咪唑；驅(qū)白巴布期混懸液高劑量組；驅(qū)白巴布期混懸液中劑量組；驅(qū)白巴布期混懸液低劑量組。每組動(dòng)物，正常飲食飲水。陽(yáng)性對(duì)照組每天給左旋咪唑0.25 mg／(10 g·d)；配制6.5％的驅(qū)白巴布期片混懸液，高劑量組小鼠灌胃2次／d，0.3 ml／次；中劑量組小鼠灌胃2次／d，0.2 rnl／次；低劑量組小鼠灌胃1次／d，0.2 ml／次；正常對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水0.2 ml。除正常對(duì)照組外，其余5組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始日一次性予以腹腔注射環(huán)磷酸胺(300 mg／)，誘導(dǎo)建立小鼠免疫功能低下模型。連續(xù)給藥10 d。

 
3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠體重及脾臟重量及免疫球蛋白IgC，IgM，IgA的影響  A部分小鼠末次用藥后禁食，于末次給藥后24 h處死A組小鼠，取脾，取胸腺，稱(chēng)重，計(jì)算脾臟、胸腺指數(shù)(mg／l0g體重)，并摘眼球取血，分離血清用于測(cè)定免疫球蛋白IgG，IgM，IgA。數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

 
3.2 對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖作用的影響(MTT法)  取上述A部分小鼠秤過(guò)體重后，用75％酒精浸泡5rain，無(wú)菌操作取脾，稱(chēng)重后，放人裝有5 ml Hankerg液的平皿中，用200目鋼網(wǎng)研磨過(guò)篩，制成細(xì)胞懸液。取出100µl用于計(jì)數(shù)。將其余細(xì)胞懸液移入離心管中，離心1 500 r／rain，5 min，棄去上清，用完全1640培養(yǎng)液稀釋?zhuān)瞥?.0×107／ml的脾細(xì)胞懸液，細(xì)胞培養(yǎng)采用96孔培養(yǎng)板，每孔加入脾細(xì)胞懸液100µl，平行3個(gè)復(fù)孔，然后加入使得孔最終濃度為5 g／ml的脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(Con A)液10 l，同時(shí)做不加Con A、LPS的陰性對(duì)照孔，37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，于培養(yǎng)結(jié)束前4 h加入MTr，每孔10µl (5mg／m1)，培養(yǎng)結(jié)束后，棄上清液后每孔加入100µl二甲基亞礬(DMSO)裂解液，吹打混勻，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀在490 nm處測(cè)定每孔OD值。

 
3.3 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)  B組小鼠于實(shí)驗(yàn)第l0天末次給藥后1 h，給各組小鼠腹腔內(nèi)注射淀粉肉湯1 ml／只，1h后每鼠腹腔注射5％雞紅細(xì)胞懸液1.0 ml。于注射雞紅細(xì)胞后2 h，將小鼠脫頸椎處死仰臥位固定于鼠板上，經(jīng)腹腔注射生理鹽水1.0 ml，輕輕按摩小鼠腹部l min，然后剪開(kāi)腹壁，抽取小鼠腹腔洗液滴于2張干凈的載玻片上，每片0.2 ml涂片。將涂片置于恒溫37°C孵育箱中溫育40 min，使載玻片上腹腔洗液干燥。干燥后用乳頭吸管抽取生理鹽水輕輕沖洗，以洗去未貼片的細(xì)胞，晾干，95％ 乙醇中固定15 rain，用吉姆薩一瑞氏液染色15 min，用蒸餾水輕輕沖洗，晾干。在顯微鏡下每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)數(shù)已吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)。按下列公式計(jì)算每鼠巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)。數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

 
吞噬百分率(％)=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)／100個(gè)巨噬細(xì)胞。
 
4、討論

胸腺是T淋巴細(xì)胞分化成熟的中樞免疫器官，脾臟則是體內(nèi)最重要的外周免疫器官，也是T，B淋巴細(xì)胞定居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所，它們與機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫密切相關(guān)，在免疫功能低下時(shí)常有胸腺、脾臟萎縮，體積變小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠形成免疫抑制的實(shí)驗(yàn)條件下，驅(qū)白巴布期片能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胸腺重量增加，高劑量使脾臟重量增加更為顯著。巨噬細(xì)胞是一類(lèi)幾乎參與一切免疫反應(yīng)的細(xì)胞，在調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞功能和免疫應(yīng)答上的重要作用已為人們所重視，其主要功能包括分解各種異物并與之相互作用、刺激和增進(jìn)淋巴細(xì)胞的免疫活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示驅(qū)白巴布期片可以提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬作用。

（責(zé)任編輯：譚艷麗）