慢性缺氧是導(dǎo)致慢性腎臟病腎臟纖維化發(fā)生的重要原因，但其分子體機制尚不清楚。西京醫(yī)院的劉立敏教授對此進行了研究，且于2016年血液凈化論壇進行了相關(guān)議題的演講?，F(xiàn)對其研究總結(jié)如下：

研究方法：

生物信息學(xué)檢測：p53基因啟動子區(qū)存在HIF-1α潛在的結(jié)合位點序列。缺氧誘導(dǎo)腎小管上皮細胞，PCR檢測HIF-1α/p53的表達豐度。采用EMSA和ChIp實驗明確p53與下游靶基因CyclinB1，CKD1的結(jié)合作用。進一步采用HIF-1αsiRNA、P53激動劑/抑制劑處理缺氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞，利用qRT-PCR、Westernblotting、免疫組化和免疫熒光方法檢測細胞周期相關(guān)蛋白的變化，流式細胞術(shù)檢測缺氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞，分析G2/M期細胞比例的變化，檢測促纖維化因子TGF-β、α-SMA、FN、COL1A1、COL3A1基因和蛋白的變化。構(gòu)建小鼠UUO腎間質(zhì)纖維化模型，采用HIF-1αsiRNA、P53激動劑/抑制劑處理UUO動物模型，觀察其對腎組織病理、腎功能、小管損傷，細胞周期相關(guān)基因與蛋白、促纖維化基因與蛋白表達的變化。

研究結(jié)果：

通過缺氧可體外誘導(dǎo)腎小管上皮細胞HIF-1α/p53通路的活化，從而導(dǎo)致細胞外基質(zhì)沉積增加，膠原合成增加，促進腎臟纖維化。并且在缺氧性腎病組織中HIF-1α/p53表達增加，與纖維化程度呈正相關(guān)性。生物信息學(xué)預(yù)測：P53基因啟動子區(qū)存在HIF-1α潛在的結(jié)合位點序列。報告基因和ChIP實驗證實：HIF-1α直接轉(zhuǎn)錄激活P53的表達。采用EMSA和ChIp實驗明確P53與下游靶基因CyclinB1，CKD1的結(jié)合作用。缺氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞和UUO模型中HIF-1α/p53與CyclinB1，CKD1的表達成正相關(guān)。與我們推測，缺氧后HIF-1α/p53高表達，進通過CyclinB1，CKD1參與細胞周期G2/M期阻滯，導(dǎo)致細胞不能有效分裂，引起促纖維化因子的產(chǎn)生增加，促進了腎臟纖維化。

研究結(jié)論：

缺氧可以激活HIF-1α/p53高表達，將通過CyclinB1，CKD1參與細胞周期G2/M期阻滯，促進了腎臟纖維化，這一機制揭示，為闡明缺氧性腎損傷機制和腎臟纖維化提供全新視角，為探討新的治療手段提供重要線索。