胰島細(xì)胞膜抗體概述
胰島細(xì)胞膜抗體(islet cell surface antibody,ICAS)是胰島細(xì)胞膜表面抗原的自身抗體,屬I(mǎi)gG抗體,具有臟器特異性,而非種屬特異性。ICAS可作用于胰島細(xì)胞表面抗原,形成抗原抗體復(fù)合物,從而影響細(xì)胞的正常功能。
胰島細(xì)胞膜抗體正常值
陰性。
胰島細(xì)胞膜抗體臨床意義
1型糖尿病患者血清ICSA可出現(xiàn)陽(yáng)性。
胰島細(xì)胞膜抗體檢查方法
本法分三個(gè)步驟,即抗原與抗體反應(yīng)、B和F分離和放射性測(cè)定。
(1)抗原與抗體反應(yīng):將標(biāo)本(非標(biāo)記抗原)、標(biāo)記抗原和抗血清順序定量加入小試管內(nèi),置室溫(15~30℃)作用24h,使其充分競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。
(2)B、F分離:分離技術(shù)多種多樣,常用沉淀法。①第二抗體沉淀法:又稱(chēng)雙抗體法,在受檢抗原與第一抗體特異性反應(yīng)后加入相應(yīng)的第二抗體,使形成的抗原-第一抗體-第二抗體的復(fù)合物共沉,一經(jīng)離心即可使結(jié)合標(biāo)記抗原B與游離抗原F分離。本法是特異性沉淀,分離完全,非特異性結(jié)合力低。但第二抗體用量較大,成本較高。此外血清濃度、抗凝劑的有無(wú)因素可在一定程度上影響結(jié)果。②聚乙二醇(PEG)沉淀法:使蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)狀態(tài),水化層破壞而導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。本法優(yōu)點(diǎn)是PEG制備方便、價(jià)廉、分離快速,缺點(diǎn)是非特異沉淀物較多,分離不完全。③第二抗體-聚乙二醇沉淀法:本法既有PEG法的快速沉淀優(yōu)點(diǎn),且保持第二抗體特異性沉淀的作用,又減少第二抗體用量,并降低PEG濃度,使非特異沉淀物減少。④活性炭吸附法:利用活性炭表面活性將小分子的游離部分吸附。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖,使它表面具有一定孔徑的網(wǎng)眼,從而允許小分子游離抗原或半抗原逸入而被吸附,而大分子復(fù)合物則被排斥在外。在抗原與抗體反應(yīng)后,加入葡聚糖-活性炭,放置5~10min,使游離抗原吸附在活性炭顆粒上,離心使顆粒沉淀,上清液中含有結(jié)合的標(biāo)記抗原。
(3)放射性強(qiáng)度測(cè)定:B和F分離后,即可測(cè)定其放射性強(qiáng)度。測(cè)量?jī)x器有兩類(lèi):液體閃爍計(jì)數(shù)儀(測(cè)β射線(xiàn))和晶體閃爍計(jì)數(shù)儀(測(cè)γ射線(xiàn))。計(jì)數(shù)單位是探測(cè)器輸出的電脈沖數(shù),單位為cpm(脈沖數(shù)/min)。
每次測(cè)定均需作一標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖,以標(biāo)準(zhǔn)抗原的不同濃度為橫坐標(biāo),以測(cè)到的相應(yīng)放射性強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖。放射性強(qiáng)度可任選B或F,亦可采用計(jì)算值B/B+F、B/F或B/B0。標(biāo)本應(yīng)作雙份測(cè)定,取其平均值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出相應(yīng)的受檢抗原濃度。
胰島細(xì)胞膜抗體注意事項(xiàng)
從胰島β細(xì)胞分泌的胰島素大部分在肝腎滅活,其中約40%~50%經(jīng)門(mén)靜脈入肝滅活,因此肝腎功能狀態(tài),尤其是肝功能情況是影響循環(huán)血中胰島素含量的重要因素;糖尿病患者在使用胰島素,尤其是動(dòng)物胰島素后,體內(nèi)常產(chǎn)生胰島素抗體,由于胰島素與胰島素抗體可產(chǎn)生高度免疫反應(yīng),故可影響血漿胰島素的測(cè)定。另外,血液中胰島素原、前胰島素原含量以及垂體前葉、腎上腺皮質(zhì)、甲狀腺亢進(jìn)等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病,噻嗪類(lèi)利尿劑、糖皮質(zhì)激素等多種藥物以及感染、發(fā)熱、手術(shù)等應(yīng)激狀態(tài)都是影響胰島素測(cè)定的常見(jiàn)因素。