載脂蛋白CⅢ概述
載脂蛋白C是極低密度脂蛋白膽固醇的主要載脂蛋白,也存在于高密度脂蛋白-膽固醇和低密度脂蛋白-膽固醇中,有3種不同的載脂蛋白C,即ApoCⅠ、ApoCⅡ、ApoCⅢ,它是CM、VLDL他和HDL的少量結(jié)構(gòu)蛋白。
載脂蛋白CⅢ正常值
單向免擴散法:90-164mg/L。
載脂蛋白CⅢ臨床意義
升高:高脂血癥。
載脂蛋白CⅢ檢查方法
靜脈抽血。
載脂蛋白CⅢ注意事項
(1)免疫透射比濁法:
①關于抗血清:比濁測定與其他方法相比對抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜??寡逯斜仨毑缓s抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達到免疫純、色譜純與電泳純,這不是一般實驗室都能做到的??寡逍r(滴度)不可低于16。目前國內(nèi)某些商品試劑中,apoA-Ⅰ抗血清效價極低,選購試劑盒時必須注意。如果沒有在選購前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗,應請有條件的單位鑒定之。
②上法中標本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl),如有精密加樣器,可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實驗室的條件(如不同類型的自動化儀器),作適當修改時應注意抗原抗體的比例,必須十分注意反應體系中不可有抗原過量,線性上限不可低于2.5g/L。換言之,抗血清用量必須充裕,否則標本中apoA-Ⅰ高水平時測出結(jié)果偏低。目前國內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價過低,操作中所定標本用量又過大(如3~5μl),抗體明顯不足,測出結(jié)果必然不準確。
③為了達到準確測定的目的,apoA-Ⅰ與B比濁測定(終點法)中必須作校準曲線計算結(jié)果。一定范圍(低標本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線關系,直線回歸計算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1),所以用單點校準計算結(jié)果偏差較大,使測出結(jié)果不能準確反映濃度的高低(高的偏低,低的偏高)。千萬不要因為單點法簡便而忽略了測定的準確性。無論用何種自動化儀器,必須先試作校準曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復測試,回歸線的截距不明顯時,才能采用單點校準法。標本用量在3~5μl時,即使加大抗血清用量,濃度與濁度也不成直線關系,只能用曲線直線化轉(zhuǎn)換后計算。
④主要干擾因素是血清本身的混濁(如高脂血清),用超離心或脂肪酶水解等標本預處理方法都不實用。用表面活性劑消濁的作用也有限,所以在測定中必須作標本空白管。除了自動分析中可采用兩點法外,手工法用單一試劑而不扣除標本空白的做法是錯誤的。為了減少基質(zhì)效應對濁度反應的影響,必須用定值血清作校準物。此外,塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。
⑤有的商品試劑盒(包括某些進口產(chǎn)品)所附校準血清定值不準確,是誤差的重要來源。
(2)火箭電泳法:
①抗原稀釋倍數(shù)與抗血清用量的選擇,應以火箭峰清晰、校準曲線斜率適中并成直線為宜。本法同時測定apoA-Ⅰ與apoB,應調(diào)整兩種抗血清用量,使二者峰高有區(qū)別,apoB峰高不小于1cm。
②不同種類來源的抗血清(如兔與羊),在等效價的情況下進行試驗,結(jié)果會有差異。apoA-Ⅰ測定以兔抗血清為好。用兔血清時峰形尖細,而羊血清所產(chǎn)生的峰粗,峰尖圓鈍,有時在峰頂前出現(xiàn)虛影。校準血清所作校準曲線斜率也不同。但不論用何種抗血清,定量結(jié)果差別不大。
③在一定條件下電泳,不同稀釋度校準血清的峰高不會有明顯變動,校準曲線斜率基本一致。如標本峰高超出校準曲線范圍時,應調(diào)整標本稀釋倍數(shù)后重測。板間CV通常小于5%。
④火箭電泳結(jié)果可以用染色法或直接肉眼觀察可見的火箭峰。前者用標本少,節(jié)省抗血清,但如適當增加標本及抗血清用量,不染色更為方便。所用瓊脂糖應為標準電滲或低電滲的,凝膠中加入適量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
⑤火箭峰的測量可以計算面積或峰高,面積是峰高乘以峰寬(峰半高處的寬度)。測量精度最好能達0.1mm。須用機械或電子放大設備。標準曲線范圍內(nèi)峰高以1~4cm為宜。
⑥本法適用于少量標本分析。也適用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)測定。