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紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(ROFT)概述
正常紅細(xì)胞為雙凹圓盤形,在低滲鹽水中溪水膨脹的適應(yīng)性大,一般可增加70%的體積而不破裂。紅細(xì)胞滲透脆性是測(cè)定紅細(xì)胞對(duì)不同低滲鹽水溶液的抵抗力。這種抵抗力與紅細(xì)胞表面積與體積的比值有關(guān)。表面積大的體積小者對(duì)低滲鹽水抵抗力較大(脆性低);反之則抵抗力較小(脆性增加)。本試驗(yàn)對(duì)確定溶血性貧血和鑒別黃疸的種類有一定的參考價(jià)值。
紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(ROFT)正常值
開始溶血:4.2-4.6g/L NaCl (71.8-78.6mmoL/L)
完全溶血:2.8-3.29g/L NaCl (47.9-54.7mmoL/L)。
紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(ROFT)臨床意義
1.脆性增加:試驗(yàn)結(jié)果與正常對(duì)照比較,提高0.04%者即有意義。 見(jiàn)于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血伴球形紅細(xì)胞增多癥,也可見(jiàn)于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥和部分遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥患者。
2.脆性減低: 見(jiàn)于缺鐵性貧血、地中海性貧血、鏈狀細(xì)胞貧血、靶形紅細(xì)胞增多癥、血紅蛋白增多癥、脾切除術(shù)后、肝臟疾病、阻塞性黃疸等。
紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(ROFT)檢查方法
1、制備不同濃度的NaCl溶液。先配置1%濃度的低滲NaCl溶液100ml,然后去口徑相同的干凈試管12支,編號(hào)排列在試管架上,按下表分別向各試管內(nèi)加入1%NaCl溶液和蒸餾水后混勻,配置12種0.68%~0.24%不同濃度的低滲NaCl溶液。
2、分別配置0.85%濃度的NaCl溶液、1.9%濃度的尿素溶液。另取3支小試管,編號(hào)13~15,分別盛2.5ml 0.85%NaCl溶液。1.9%尿素溶液和蒸餾水。
3、碘酒、酒精消毒皮膚后用滅菌干燥的、肝素濕潤(rùn)的注入器從肘正中靜脈取2ml,利己混勻,將其中1ml加入試管,余血一次向15支試管內(nèi)各加入1滴,輕輕混勻。
4、觀察13、14、15管的變化,其余12管在室溫下靜置1小時(shí),然后觀察混合液的顏色和透明度。
(1)試管內(nèi)液體完全變成透明紅色,說(shuō)明紅細(xì)胞全部破裂,稱完全溶血。
(2)試管內(nèi)液體下層為渾濁紅色,上層為透明紅色,表示部分虹吸包破裂,稱不完全溶血。
(3)試管內(nèi)下層為渾濁紅色,上層為無(wú)色透明,說(shuō)明紅細(xì)胞全部沒(méi)有破裂。
5、記錄試驗(yàn)結(jié)果。包括受試者姓名和紅細(xì)胞滲透脆性范圍(即最小抵抗力的NaCl溶液濃度和最大抵抗力的NaCl溶液濃度)以及13~15管的結(jié)果。
6、取第6管和第13管混合液各1滴于載玻片上,蓋上蓋玻片,在顯微鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)。
紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)(ROFT)注意事項(xiàng)
(1)每次檢查均應(yīng)有正常對(duì)照,正常對(duì)照與被檢者相差0.04%,即有臨床意義。
(2)試劑配制時(shí)要求準(zhǔn)確,一二個(gè)月要更換1次試劑,因水蒸發(fā)可致NaCl濃度增加。
(3)取血時(shí)應(yīng)防止紅細(xì)胞破壞。
(4)抗凝劑以肝素為宜若用去纖維蛋白血,檸檬酸或草酸鹽,可以增加離子強(qiáng)度影響滲透壓。
(5)如開始及完全溶血的結(jié)果不易判斷,可以離心沉淀后進(jìn)行觀察。
(6)地中海貧血的滲透脆性降低,應(yīng)進(jìn)行低濃度NaCl溶液的檢查。
(7)嚴(yán)重貧血者,要把RBC配成50%濃度,黃疸者要洗紅細(xì)胞。
(8)血標(biāo)本在冰箱中保存不得超過(guò)6h。